諾如病毒抗原檢測(cè)卡（膠體金法）

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（三）透析

1、蛋白質(zhì)溶液10 000g離心30 min（4℃）。棄上清保留沉淀；

2、將沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS-0.2g /L疊氮鈉中。沉淀溶解后放入透析袋，對(duì)PBS-0.2g/L疊氮鈉透析24-48小時(shí)（4℃），每隔3-6小時(shí)換透析緩沖液一次，以*除去硫酸氨；

3、透析液離心，測(cè)定上清液中蛋白質(zhì)含量。

四、注意事項(xiàng)

（一） 先用較低濃度的硫酸氨預(yù)沉淀，除去樣品中的雜蛋白。

1、邊攪拌邊慢慢加SAS到樣品溶液中，使?jié)舛葹?.5:1 (v/v)；

2、將溶液放在磁力攪拌器上攪拌6小時(shí)或過夜（4℃）；

3、3000g離心30 min（4℃），保留上清液；

4、上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次離心得到沉淀。將沉淀溶于PBS，透析除去硫酸氨；

5、雜蛋白與欲純化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差別很大時(shí)，用預(yù)沉淀除雜蛋白非常有效。

（二）為避免體積過大，可用固體硫酸氨進(jìn)行鹽析；硫酸氨沉淀法與層析技術(shù)結(jié)合使用，可得到更進(jìn)一步純化的抗體。使用固體硫酸銨和硫酸銨飽和溶液，各有各的優(yōu)缺點(diǎn)，比較如下：

1、造成蛋白質(zhì)變質(zhì)的程度：固體的硫酸銨>硫酸銨飽和溶液

利用硫酸銨飽和溶液，滴入的速度可以很快而不造成變質(zhì)。不像固體硫酸銨只能磨碎慢慢加入，速度一快蛋白質(zhì)變質(zhì)(溶液有致密的白色氣泡產(chǎn)生)。

2、操作的容易度：硫酸銨飽和溶液>>固體硫酸銨

固體硫酸銨大的缺點(diǎn)就是不易操作，要一直敲敲敲又不能太快，所以當(dāng)要溶解的蛋白質(zhì)很多時(shí)，這是很累的步驟。然而硫酸銨飽和溶液比較麻煩只有在配制部分，要先加熱讓它飽合后，回到操作溫度讓它過飽和，后用濾紙把硫酸銨結(jié)晶去掉。